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    首頁-技術文章-【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關聯Rf到CV轉換

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    【ISCO】將TLC與等度洗脫分離相關聯Rf到CV轉換

    更新時間:2024-09-24       點擊次數:1555
    一、應用概述

    在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系統時,或者在純化沒有色團的化合物時,可以使用薄層色譜法(TLC)來定位收集到的餾分中的純化化合物。


       

    如果已知化合物的保留因子(Rf),則可以根據柱體積估計含有所需物質的餾分收集管。柱體積是裝填柱的空隙(空余)體積。這一規格在所有RediSep®色譜柱的色譜應用說明3中都有列出。


       

    了解Rf和柱體積可以讓您大致了解化合物可能位于哪些餾分收集管的范圍。


       

    二、一般方法    

    將待分離的化合物加載到TLC板上,并分離成幾個種類。


       

    控制參數    

    TLC的幾個參數必須保持一致以獲得良好的相關性。

    • TLC溶劑應以體積比的方式量取,以便混合物在轉移到梯度生成系統時保持恒定。

    • 為了獲得最佳結果,建議對層析室和板進行平衡。

    • 推薦將板運行至距離板頂部1-4厘米以內,以實現良好的分離。

    • 在運行板之前,應標記樣品斑點位置和溶劑水平。

    • 應在運行結束時標記溶劑洗脫高度和樣品斑點位置。

    • 在進行TLC時,層析室中的溶劑水平絕不能觸及樣品,并且應覆蓋層析室以維持氣相中的平衡。


       

    假設    

    有幾個假設:

    • 色譜柱和TLC板使用相同類型的固定相。

    • TLC方法中使用的溶劑與液體分離中使用的溶劑相同。

    因此,液體分離必須是等度洗脫。

    • TLC的Rf應小于0.5且大于0.1,如果不是這樣,則可能需要不同的溶劑系統。


       

    Rf    

    Rf — 保留因子。樣品斑點移動的距離。Rf通過以下公式計算:

       

    Zx — 斑點從其起始點(樣品線)移動的距離。請參考圖1和圖2。
       

    Zf — 從原始溶劑線到最終溶劑前沿的距離。

    Z0 — 從溶劑線到樣品線的距離。

           

    圖1:TLC起始

       

    圖2:TLC完成


    柱體積相關性    

    一旦知道了混合物中某個組分的Rf,就可以與柱體積(CV)建立相關性。


       

    如果Rf值在0.1和0.5之間,它可以被輸入到以下公式中,以給出收集管的范圍。

       

    其中:

    Volc — 柱的空隙體積。

    Volf — 每個管中收集的餾分體積。


       

    三、示例 

    請參考圖3。


       

    圖3:TLC示例


    一個丙酮斑點洗脫了62毫米(Zx=62毫米),溶劑水平到水平樣品線的距離是8毫米(Z0=8毫米),溶劑前沿移動的距離是170毫米(Zf=170毫米)。Rf是無量綱的,所以單位被省略,進行計算:


       


    為了將這與通過柱體積為16.8 mL的12克RediSep柱進行的純化相關聯,并收集為10 mL的餾分,將Rf應用到以下公式中:


       
       


    四、計算機

    人們可以輕松使用Microsoft® Excel®或其他電子表格程序來創建Rf和試管相關性計算器:


       

    圖4:Rf和試管相關性計算器


       

    五、參考    

    Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today", Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).

    SCROLL

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