【Application Note】類肽和肽-類肽雜交體的自動合成

--摘要--

• Liberty Blue^TM自動微波肽合成儀允許快速高效地獲取肽、類肽和類肽-肽雜交體

• 肽-類肽混合物 Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH₂ 在 2 小時內合成，純度為81%

--簡介--

類肽是各種 N-取代的甘氨酸的聚合物。雖然在結構上與肽相似（圖 1），但類肽對蛋白水解降解具有抗性，這歸因于它們的酰胺鍵的全部取代。 類肽在體內的穩定性提高，使其成為藥物發現和開發的有吸引力的類肽靶標1,2。

圖1. 多肽和類肽的結構比較

類肽和類肽-肽雜化物通常通過“亞單體"過程合成，該過程包括兩個步驟：(1) 用溴乙酸和 N,N' 二異丙基碳二亞胺(DIC) 酰化和 (2) 用單取代胺進行親核置換 （圖2）1,3。

圖2. 典型的類肽合成

由于許多結構不同的單取代胺可商購獲得，因此可以很容易地合成具有多種側鏈的類肽2,3 。然而，類肽的常規合成每個殘基可能需要長達三個小時1 。微波輻射已被證明可以顯著減少合成時間，使類肽文庫和類肽-肽雜交體的生產更加可行 1-3。

--材料和方法--

類肽-多肽雜交體合成：Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly- (NLys)-NH₂

使用 CEM Liberty Blue 自動微波肽合成儀在 Rink Amide ProTide LL 樹脂（離子交換容量：0.18 meq/g ）上以 0.1 mmol 的規模制備類肽-肽混合物（圖 3）。 對于類肽殘基，用哌啶在 DMF 中進行脫保護，用溴乙酸和 DIC 進行酰化，并用 DMF 中的單取代胺進行親核置換。 對于肽殘基，用哌啶在 DMF 中進行脫保護，并用 5 倍過量的 Fmoc-AA-OH、DMF 中的 DIC 和 DMF 中的 Oxyma Pure 進行偶聯反應。 使用具有 TFA/H₂O/TIS/DODT 的 CEM Razor 高通量肽切割系統進行切割。 裂解后肽在無水乙酉迷中沉淀并凍干過夜。

圖3. 目標類肽-多肽雜交體: Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH₂

類肽-多肽雜交體分析

在配備有 PDA 檢測器的 Waters Acquity UPLC 系統上分析類肽-肽混合物，該檢測器配備 Acquity UPLC BEH C8 色譜柱（1.7 mm 和 2.1 x 100 mm）。UPLC 系統連接到 Waters 3100 Single Quad MS 用于結構測定。在 Waters MassLynx 軟件上進行峰分析。使用 (i) H₂O 和 (ii) MeCN 中的 0.1% TFA 梯度洗脫進行分離。

--結論--

在 Liberty Blue 自動微波肽合成儀上，Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)- Gly(NLys)-NH₂ 的微波增強 SPPS 產生了純度為 81% 的目標肽（圖 4）。

圖4. Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH₂的UPLC色譜圖

結果

CEM Liberty Blue 自動微波肽合成儀允許快速有效地獲取肽、類肽和類肽-肽雜交體。 微波增強的 SPPS 產生了純度為 81% 的類肽-肽雜交體 Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH₂。